leupaxin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405101-ACT

LPXNは、フォーカルアドヒージョンに多く局在するパキシリンファミリーのアダプタータンパク質であるロイパキシン（leupaxin）をコードしており、インテグリン依存性シグナル伝達とアクチン細胞骨格のリモデリングを協調させます。ロイパキシンは、キナーゼやスキャフォールドタンパク質との相互作用を介して、細胞接着、遊走、メカノトランスダクションに寄与し、細胞外マトリックスの感知やその下流の転写プログラムを形作る過程に関与します。LPXNの活性は、細胞運動性や浸潤性の挙動を制御するフォーカルアドヒージョン経路およびRho GTPase関連経路と交差します。ロイパキシンの発現異常やそれに関わるシグナルの破綻は、複数の腫瘍環境や免疫細胞の機能状態で報告されており、転移関連表現型や接着駆動型シグナル伝達の研究における機序的ハブとしての有用性が示されています。

leupaxin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LPXNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

leupaxin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LPXN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLPXN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性leupaxinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLPXN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるleupaxin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLPXN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるleupaxin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。