Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LDLR Double Nickaseプラスミド (h): sc-400645-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LDLR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LDLRダブルニカースプラスミド（h）およびLDLRダブルニカースプラスミド（h2）は、LDLRを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: LDLR 抗体 (C7): sc-18823
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LDLR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400645-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LDLR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400645-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
低比重リポタンパク質受容体（LDLR）は細胞表面に存在するエンドサイトーシス受容体で、アポリポタンパク質BおよびEを含むリポタンパク質に結合し、クラスリン依存的にLDL粒子を細胞内へ取り込むことで、細胞のコレステロール取り込みと全身の脂質恒常性を調節します。エンドサイトーシス後、LDLRは通常、酸性化したエンドソーム内でリガンドから解離して細胞膜へリサイクルされ、受容体輸送をコレステロール感知や膜の生合成と結び付けています。LDLRの活性は、SREBPにより制御される転写プログラム、細胞内コレステロールのエステル化、ならびに脂質代謝のフィードバック調節と連動しています。LDLRの発現や機能の変化は、脂質異常症の生物学や動脈硬化関連経路の研究において広く検討されているほか、リポタンパク質取り込みや受容体リサイクルの細胞モデルでも重要な解析対象となっています。
LDLR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LDLR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LDLR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LDLRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LDLRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。