LDLR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400645-ACT

O gene humano **LDLR** codifica o receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDLR), um receptor endocítico de superfície celular que se liga a lipoproteínas contendo ApoB e ApoE para mediar a internalização dependente de clatrina e o processamento lisossomal de partículas ricas em colesterol. A atividade do LDLR é um determinante central da homeostase do colesterol celular e alimenta programas de biossíntese e captação de lipídios regulados por SREBP, integrando-se a mecanismos de detecção de esteróis, tráfego de membranas e vias de endossomo–lisossomo. Alterações na expressão ou na função do LDLR estão fortemente associadas à biologia da dislipidemia e a mecanismos relevantes para a aterosclerose, tornando-o amplamente utilizado para estudar o metabolismo de lipoproteínas, a reciclagem do receptor e respostas de sinalização induzidas por lipídios. O LDLR também é utilizado como gene de leitura para controle transcricional de vias do colesterol e para modelar relações genótipo–fenótipo no manejo de lipídios.

LDLR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LDLR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LDLR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LDLR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LDLR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LDLR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LDLR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LDLR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LDLR em células tumorais com expressão de LDLR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.