LDH-A CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437361-ACT

乳酸デヒドロゲナーゼA（LDH-A）は細胞質に存在する酸化還元酵素で、ピルビン酸と乳酸の相互変換を触媒すると同時にNADH/NAD⁺のリサイクルを行い、高い解糖系フラックス下での解糖系ATP産生を支えます。ラット細胞では、LDH-A活性がレドックスバランスと乳酸産生の維持に寄与し、解糖系とミトコンドリア代謝の間の炭素フローに影響を与えるとともに、低酸素や栄養ストレスに対する細胞応答にも関与します。LDH-A依存的な乳酸代謝は代謝微小環境を調節し、増殖、炎症、酸化ストレスを制御する経路とも交差します。LDH-Aの発現や活性の破綻（調節異常）は、がん生物学における代謝リモデリングの特徴として、また虚血性あるいは炎症性の組織障害モデルにおいてもしばしば研究対象となっています。

LDH-A CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LDH-A CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LDH-Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLDH-A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLDH-A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。