LCRG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410137-ACT

GGNBP2はLCRG1をコードしており、LCRG1は転写制御ならびに細胞増殖・分化プログラムの制御に関与するとされる核内タンパク質です。報告されている機能から、GGNBP2はクロマチン関連過程や、細胞周期の進行および組織恒常性に影響する遺伝子発現ネットワークの調節に関与することが示唆されています。腫瘍生物学や細胞形質転換の研究ではGGNBP2/LCRG1発現の変化が観察されており、がん関連シグナル伝達における状況依存的な制御因子としての位置づけを支持しています。ヒト標的としてのLCRG1は、上流の転写制御、下流の遺伝子発現シグネチャ、ならびに増殖・遊走・ストレス応答に関連する表現型を解析するための有用な手がかりとなります。

LCRG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GGNBP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LCRG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GGNBP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGGNBP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LCRG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGGNBP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLCRG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGGNBP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLCRG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。