Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LC3B Double Nickaseプラスミド (h): sc-417828-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LC3B Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LC3Bダブルニカースプラスミド（h）およびLC3Bダブルニカースプラスミド（h2）は、MAP1LC3Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LC3B Double Nickaseプラスミド (h) | sc-417828-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LC3B Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-417828-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP1LC3B は、微小管関連タンパク質1A/1B軽鎖3B（LC3B）をコードしており、オートファジー装置の中核をなす構成要素である。LC3B は ATG7/ATG3 依存的な脂質化を受け、オートファゴソーム膜上で LC3-II を形成する。LC3B は、p62/SQSTM1 などの選択的オートファジー受容体に存在する LC3-interacting region（LIR）モチーフを介して、ファゴフォア（隔離膜）の伸長やカーゴの捕捉を担い、ユビキチン化基質をオートファゴソーム形成へと連結する。これらの相互作用を通じて、LC3B は mTOR や AMPK シグナル伝達を含む栄養感知およびストレス応答経路を統合し、プロテオスタシスとオルガネラ品質管理を制御する。LC3B 関連オートファジーの異常は、神経変性、感染生物学、代謝異常、ならびにがんに伴うストレス適応に関与するとされており、LC3B はオートファジー研究において頻用されるマーカーであると同時に、機構解明上の重要な結節点でもある。
LC3B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAP1LC3B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAP1LC3B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAP1LC3Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAP1LC3Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。