LATS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401312-ACT

LATS1（large tumor suppressor kinase 1）は、Hippoシグナル伝達経路の中核を担うセリン／スレオニンキナーゼであり、YAP/TAZなどの主要な下流エフェクターをリン酸化することで、細胞増殖を抑制しアポトーシスを促進します。LATS1は、細胞密度シグナル、細胞極性、機械的シグナル、GPCRからの入力を統合し、増殖や上皮間葉転換（EMT）を駆動する転写プログラムを抑えることで、組織恒常性の維持に寄与します。LATS1活性の破綻やHippo経路の機能障害は、多様ながんの文脈において、接触阻害の異常、ゲノム不安定性、腫瘍性の転写状態としばしば関連します。ヒト細胞では、LATS1の機能は細胞骨格の構築や細胞周期制御とも結び付いており、増殖と分化を形作るシグナル間クロストークを解明するうえで有用な結節点（ノード）となります。

LATS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LATS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LATS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LATS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLATS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LATS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLATS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLATS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLATS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLATS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。