LASS6 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403901-NIC

CERS6 codifica a ceramida sintase 6 (LASS6), uma enzima localizada no retículo endoplasmático que gera preferencialmente ceramida C16, um esfingolipídio bioativo central na regulação da composição de membranas e da sinalização celular. Ao controlar a abundância de ceramida, a LASS6 influencia o metabolismo de esfingolipídios e se cruza com vias que governam a apoptose, a autofagia, as respostas ao estresse do RE e a sinalização inflamatória. Alterações na atividade de CERS6 têm sido associadas à desregulação da homeostase lipídica e a fenótipos relevantes para a sobrevivência e migração de células cancerosas, o estresse metabólico e processos neuroinflamatórios. Como um nó na interconversão entre ceramida–esfingomielina–glicoesfingolipídios, CERS6 é frequentemente estudado para conectar a remodelação lipídica à função de organelas e a programas de adaptação ao estresse.

LASS6 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CERS6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CERS6. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CERS6. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CERS6 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.