Laminin α-5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401168-ACT

LAMA5 codifica la laminina α-5, una subunità fondamentale degli eterotrimeri laminina-511 e laminina-521 che organizzano le membrane basali e regolano adesione, polarità e differenziamento di cellule epiteliali ed endoteliali. Attraverso interazioni con integrine, distroglicano e altri recettori della matrice extracellulare, la laminina α-5 contribuisce alla segnalazione delle adesioni focali e a vie a valle come FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, che coordinano migrazione e sopravvivenza cellulare. Matrici ricche di LAMA5 modellano l’architettura tissutale in cute, glomerulo renale, polmone e sistema vascolare, influenzando la funzione di barriera e la morfogenesi. Una deposizione o una segnalazione deregolata della laminina α-5 è associata ad alterazioni dell’integrità della membrana basale ed è stata studiata in contesti quali fibrosi, rimodellamento infiammatorio e microambienti di invasione tumorale.

Laminin α-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMA5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin α-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMA5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMA5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin α-5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMA5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin α-5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin α-5 nelle cellule tumorali con espressione di LAMA5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.