Plasmide Double Nickase (m) Lamin B2: sc-421446-NIC

Le gène murin **Lmnb2** code la lamine B2, un filament intermédiaire essentiel de la lamina nucléaire, qui apporte un soutien structurel à l’enveloppe nucléaire et contribue à l’organisation de la chromatine périphérique. La lamine B2 intervient dans l’architecture nucléaire, le contrôle du calendrier de réplication de l’ADN et le réassemblage mitotique de l’enveloppe nucléaire, reliant ainsi la dynamique de la lamina à la progression du cycle cellulaire et à la stabilité du génome. Par ses interactions avec les domaines associés à la lamina, elle participe à la régulation transcriptionnelle et à l’organisation de la chromatine à un niveau supérieur. Le dérèglement de la lamine B2 et d’autres composants de la lamina est impliqué dans les laminopathies et, plus largement, dans des mécanismes de fragilité nucléaire, de reprogrammation de l’expression génique et de réponses au stress étudiés dans des contextes développementaux et dégénératifs.

Lamin B2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lmnb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lmnb2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lmnb2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lmnb2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.