L-Myc Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401836-ACT

MYCL codifica a L-Myc, um fator de transcrição de hélice‑alça‑hélice básica com zíper de leucina da família MYC, que forma heterodímeros com MAX para regular a transcrição dependente da RNA polimerase II. A L-Myc modula programas que controlam a progressão do ciclo celular, a biogênese de ribossomos, a adaptação metabólica e a diferenciação associada à linhagem, integrando sinais em vias responsivas ao crescimento e ao estresse. A atividade desregulada de MYCL e a amplificação do número de cópias têm sido associadas a estados transcricionais oncogênicos, particularmente na biologia tumoral neuroendócrina e associada a carcinoma de pequenas células, em que alterações no equilíbrio da rede MYC podem remodelar a proliferação e a apoptose. Como regulador dependente do contexto, MYCL é frequentemente investigado para dissecar a expressão gênica impulsionada por MYC/MAX, o controle epigenético da atividade de promotores/realçadores (enhancers) e fenótipos de “dependência transcricional” em sistemas modelo.

L-Myc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYCL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

L-Myc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYCL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYCL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de L-Myc. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYCL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de L-Myc no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via L-Myc em células tumorais com expressão de MYCL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.