L-FABP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401554-ACT

O FABP1 humano codifica a proteína de ligação a ácidos graxos do tipo hepático (L-FABP), uma chaperona lipídica citosólica que se liga a ácidos graxos de cadeia longa, ácidos biliares e outros ligantes hidrofóbicos para coordenar o tráfego e o metabolismo intracelulares. A L-FABP dá suporte à captação de ácidos graxos, à β-oxidação, à dinâmica de gotículas lipídicas e à sinalização mediada por lipídios, conectando o balanço energético hepatocelular a programas transcricionais regulados por PPAR e a respostas ao estresse oxidativo. Alterações na expressão e na função de FABP1 têm sido associadas à desregulação do manejo hepático de lipídios e da sinalização inflamatória em contextos de doença hepática metabólica, e ele é frequentemente usado como marcador de diferenciação de hepatócitos e do estado do metabolismo lipídico. Essas características tornam o FABP1 um ponto útil para investigar vias que governam lipotoxicidade, função mitocondrial e metabolismo responsivo a xenobióticos em modelos celulares humanos.

L-FABP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FABP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

L-FABP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FABP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FABP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de L-FABP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FABP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de L-FABP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via L-FABP em células tumorais com expressão de FABP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.