KV4.3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404247-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- KV4.3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- KV4.3ダブルニカースプラスミド（h）およびKV4.3ダブルニカースプラスミド（h2）は、KCND3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
KV4.3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404247-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KV4.3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのKCND3は、電位依存性カリウムチャネルサブユニットKV4.3をコードしており、活動電位の再分極を形作り、興奮性細胞の発火頻度を調節する、速い不活性化を示すA型K+電流の主要な担い手です。KV4.3の活性は、イオンコンダクタンスをCa2+シグナル伝達、シナプス伝達、ならびに活動依存的な遺伝子発現へと結び付ける膜興奮性プログラムと統合されて働きます。神経系においてKCND3は、ニューロンのペースメーキングや樹状突起での信号処理に寄与し、またその変異は脊髄小脳失調症や心臓不整脈の表現型など、興奮性の異常に関わる疾患との関連が報告されています。これらの特徴から、KCND3は電気的シグナリングの機構、チャネルの生物物理、そして疾患関連の細胞モデルにおける遺伝子型—表現型関係を研究するための有用な標的となります。
KV4.3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCND3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCND3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCND3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCND3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。