Plasmide CRISPR d'Activation (h) Krs-2: sc-403632-ACT

STK4 code la kinase sérine/thréonine Krs-2 (également appelée MST1), un composant central du réseau de signalisation Hippo qui intègre des signaux de stress afin de réguler la prolifération, l’apoptose et l’homéostasie tissulaire. Dans les cellules humaines, l’activation de STK4 influence des cascades de kinases et des programmes transcriptionnels, notamment via la modulation de l’activité de YAP/TAZ et des interactions avec des nœuds de signalisation liés aux MAPK et à l’immunité. Krs-2 participe au contrôle des réponses au stress oxydatif, de la dynamique du cytosquelette et de la fonction lymphocytaire, ce qui l’associe à l’aptitude cellulaire et à la régulation de l’inflammation. Des altérations de la signalisation de STK4 ont été associées à une dérégulation du contrôle de la croissance et à des dysfonctionnements immunitaires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et sur des phénotypes liés à l’immunité.

Krs-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STK4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Krs-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STK4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Krs-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STK4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Krs-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Krs-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de STK4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.