Krs-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403632-ACT

STK4 codifica a quinase de serina/treonina Krs-2 (também conhecida como MST1), um componente central da rede de sinalização Hippo que integra sinais de estresse para regular a proliferação, a apoptose e a homeostase tecidual. Em células humanas, a ativação de STK4 influencia cascatas de quinases e programas transcricionais, incluindo a modulação da atividade de YAP/TAZ e a comunicação cruzada com nós de sinalização de MAPK e relacionados ao sistema imune. Krs-2 participa do controle de respostas ao estresse oxidativo, da dinâmica do citoesqueleto e da função de linfócitos, ligando-a à aptidão celular e à regulação inflamatória. Alterações na sinalização de STK4 têm sido associadas a desregulação do controle de crescimento e disfunção imune, tornando-a relevante para estudos mecanísticos da biologia do câncer e de fenótipos relacionados ao sistema imune.

Krs-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STK4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Krs-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STK4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STK4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Krs-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STK4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Krs-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Krs-2 em células tumorais com expressão de STK4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.