KLK5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404042-ACT

カリクレイン関連ペプチダーゼ5（KLK5）は、分泌型のトリプシン様セリンプロテアーゼであり、表皮の落屑、バリア恒常性、自然免疫防御を制御する細胞外プロテオリティックカスケードに関与します。KLK5は構造タンパク質のプロセシングを調節するとともに、他のカリクレインを活性化し、細胞周囲マトリックスのリモデリングや、プロテアーゼ活性化受容体（PAR）を介したシグナル伝達に寄与します。KLK5活性の制御異常は、炎症性の皮膚表現型や上皮分化の変化と関連づけられており、KLK5発現は上皮の状態や微小環境のリモデリングを示すマーカーとしてしばしば研究されます。がん生物学および皮膚科学研究では、KLK5は浸潤、サイトカインシグナル、バリア関連経路におけるプロテアーゼ駆動性の変化を解析するために用いられます。

KLK5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KLK5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KLK5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KLK5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKLK5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KLK5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKLK5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKLK5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKLK5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKLK5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。