KLF15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402267-ACT

KLF15（Krüppel-like factor 15）は亜鉛フィンガー型の転写因子で、GCリッチなプロモーター配列に結合し、転写ネットワークを統合することで、細胞種特異的な代謝および分化プログラムを制御します。ヒト組織では、糖新生や脂質代謝関連遺伝子の発現制御に寄与し、アミノ酸分解代謝を調節するとともに、栄養感知やストレス適応を形作るホルモン応答性シグナル伝達経路とも連携します。KLF15の活性はミトコンドリア機能や酸化的代謝の出力に影響し、広範な転写リプログラミングを通じて細胞状態を変化させ得ます。KLF15発現の破綻（異常）は、筋組織や心血管関連の文脈における代謝表現型およびリモデリング過程との関連が示されており、経路解析における機構的な結節点（ノード）としての利用を支持します。

KLF15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KLF15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KLF15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KLF15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKLF15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KLF15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKLF15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKLF15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKLF15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKLF15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。