KIR2.3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406604

Panoramica

KCNJ4 codifica per il canale del potassio a rettificazione entrante KIR2.3, una proteina di membrana tetramerica che conduce preferenzialmente K+ a potenziali iperpolarizzati per stabilizzare il potenziale di membrana a riposo e modulare l’eccitabilità cellulare. L’attività di KIR2.3 contribuisce all’omeostasi del potassio e alla segnalazione elettrica, influenzando processi quali la ripolarizzazione del potenziale d’azione e l’accoppiamento dell’eccitabilità nei tessuti eccitabili. Come parte della famiglia Kir2.x, interagisce funzionalmente con vie dipendenti dalla polarizzazione di membrana, incluse la segnalazione Ca2+-dipendente e l’accoppiamento stimolo-secrezione. Un’alterazione della funzione dei canali a rettificazione entrante è rilevante negli studi di elettrofisiologia, dei meccanismi aritmogeni e della disfunzione delle cellule eccitabili, rendendo KCNJ4 un bersaglio utile per analizzare il contributo dei canali ionici ai fenotipi cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR2.3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNJ4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNJ4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNJ4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR2.3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNJ4 per lo studio della segnalazione di KIR2.3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNJ4 critici per la funzione di KIR2.3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNJ4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR2.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIR2.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNJ4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR2.3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIR2.3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNJ4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNJ4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.