KIF20A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403194-ACT

KIF20A（別名MKLP2）は、微小管に結合して有糸分裂の進行を協調的に制御するキネシン様モータータンパク質をコードしており、とりわけ後期（anaphase）および細胞質分裂（cytokinesis）の過程で重要な役割を担います。KIF20Aは、クロモソーム・パッセンジャー複合体の局在や主要な有糸分裂キナーゼの制御を介して、中心紡錘体の形成とアブシジョン（最終分離）を支え、細胞周期制御およびゲノム安定性経路とその活性が結び付けられています。KIF20Aの発現異常は複数の腫瘍で報告されており、がん性の細胞分裂プログラムに関する研究では増殖関連マーカーとして頻繁に用いられています。その結果、KIF20Aは、有糸分裂の忠実性、紡錘体ダイナミクス、ならびに細胞質分裂と異数性や細胞ストレス応答を結び付ける機構を検討する上で、幅広く重要な標的となります。

KIF20A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIF20Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KIF20A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIF20A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIF20A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KIF20Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIF20A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKIF20A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIF20A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKIF20A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。