KIF14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408805-ACT

KIF14 codifica uma proteína motora do tipo cinesina que se localiza no fuso mitótico e no corpo médio, onde contribui para a segregação cromossómica, a organização do fuso e a citocinese. Coordena o transporte baseado em microtúbulos e interage com reguladores do fuso central para assegurar uma abscisão adequada e a progressão do ciclo celular. A expressão desregulada de KIF14 está frequentemente associada a fenótipos proliferativos e instabilidade cromossómica, ligando-a a vias que governam a fidelidade mitótica e a manutenção do genoma. Por isso, KIF14 é frequentemente estudada em modelos de controlo da divisão celular, aneuploidia e biologia tumoral, para compreender como alterações na atividade das cinesinas remodelam os desfechos mitóticos.

KIF14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF14 em células tumorais com expressão de KIF14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.