Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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KID Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408134
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KID Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico KID, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KID Antibody (B-9): sc-390640
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KID Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-408134 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KIF22 codifica la cromocinesina KID, un motore basato sui microtubuli che si lega alla cromatina e genera le forze di espulsione polare necessarie per un’accurata congressione dei cromosomi e per la dinamica del fuso mitotico durante la mitosi. L’attività di KID si integra con gli attacchi tra cinetocoro e microtubuli e con il checkpoint di assemblaggio del fuso, al fine di mantenere il corretto allineamento e la corretta segregazione dei cromosomi. La disregolazione di questi processi contribuisce all’instabilità cromosomica e all’aneuploidia, collegando il controllo mitotico dipendente da KIF22 a fenotipi del ciclo cellulare rilevanti per il cancro e a più ampie vie di mantenimento del genoma.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KID (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KIF22 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KIF22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KIF22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KID.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KIF22 per lo studio della segnalazione di KID, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KIF22 critici per la funzione di KID
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KIF22 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal KID CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KID CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KIF22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal KID Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KID (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KIF22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KIF22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.