Ketohexokinase Double Nickaseプラスミド (h): sc-403399-NIC

ヒトKHKはケトヘキソキナーゼ（フルクトキナーゼ）をコードしており、フルクトースをフルクトース-1-リン酸へとリン酸化するATP依存性酵素で、肝臓におけるフルクトース代謝の開始反応を担います。この反応により、下流でアルドラーゼBが介在する炭素フラックスが解糖系、糖新生、脂質新生へと流れ込み、食事由来フルクトースの処理を細胞のエネルギーバランスおよび代謝物シグナル伝達と結び付けます。KHKの活性は、ATP消費とリン酸のトラップを通じてヌクレオチド代謝回転および尿酸産生にも影響するため、代謝ストレス応答の研究において重要です。KHKの発現や機能の変化は、フルクトース代謝の先天性異常や、より広範な代謝疾患表現型と関連づけられており、肝細胞および腎臓モデルにおける機序解明の検討対象（ノード）として有用であることを示しています。

Ketohexokinase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KHK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KHK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KHKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KHKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。