KDEL receptor 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402751-ACT

ヒトKDELR1は、KDEL受容体1をコードしている。これはゴルジ体に局在する回収受容体で、可溶性ERシャペロンのC末端にあるKDEL様モチーフを認識し、COPI被覆小胞を介してゴルジ体から小胞体（ER）へ逆行輸送する。ERのプロテオスタシスを維持し、分泌経路を支えることで、KDELR1はERストレスシグナル伝達、アンフォールドタンパク質応答（UPR）の動態、ならびに新生タンパク質の品質管理に影響を与える。ER–ゴルジ輸送とシャペロンのリサイクリングの破綻は、分泌機能障害やプロテオトキシックストレスを特徴とする病態全般に関わり、がん生物学、神経変性、炎症性状態などと関連する。したがってKDELR1は、輸送恒常性がストレス下でのシグナル出力や細胞の適応・生存能にどのように影響するかを調べるうえで有用な結節点となる。

KDEL receptor 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KDELR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KDEL receptor 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KDELR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKDELR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KDEL receptor 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKDELR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKDEL receptor 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKDELR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKDEL receptor 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。