KCTD15 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407663-NIC

KCTD15 codifica uma proteína adaptadora que contém o domínio BTB/POZ, pertencente à família KCTD (potassium channel tetramerization domain), e que contribui para interações proteína–proteína e para a regulação de redes de sinalização. O KCTD15 tem sido associado à modulação de programas transcricionais que governam o desenvolvimento da crista neural e a adipogénese, sendo frequentemente discutido no contexto de circuitos regulatórios relacionados com WNT/β-catenina e com estados de diferenciação celular. Estudos de associação genética implicam loci de KCTD15 em características relacionadas com a obesidade, e foi relatada alteração da expressão de KCTD15 em diversos contextos relevantes para a regulação metabólica e o neurodesenvolvimento. Estas propriedades tornam o KCTD15 um alvo útil para dissecar a comunicação entre vias (cross-talk), a especificação de linhagens e as relações entre genótipo e fenótipo em modelos celulares humanos.

KCTD15 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KCTD15 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KCTD15. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KCTD15. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KCTD15 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.