KCNMB4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405044-ACT

KCNMB4は、大コンダクタンス型でカルシウムおよび電位によって活性化されるカリウム（BK）チャネルの補助サブユニットであるβ4をコードし、チャネルのゲーティング動態、カルシウム感受性、ならびに膜興奮性を調節します。ヒトの神経細胞やその他の興奮性組織において、KCNMB4は活動電位の発火特性やカルシウム依存性の再分極の微調整に寄与し、Ca2+シグナル伝達や電気生理学的恒常性と統合的に機能します。BKチャネルの挙動を規定することで、神経伝達、スパイク頻度適応、さらにイオンチャネル制御に関連する活動依存的シグナル伝達経路などのプロセスに影響を及ぼします。βサブユニット発現の変化を含むBKチャネル構成の破綻は、興奮性バランスが崩れる神経学的表現型に関与するとされており、チャネロパチーや興奮性駆動性の細胞ストレスの機序研究における有用性を支持します。

KCNMB4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KCNMB4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KCNMB4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KCNMB4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKCNMB4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KCNMB4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKCNMB4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKCNMB4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKCNMB4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKCNMB4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。