karyopherin β3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402071-ACT

IPO5は核内移行受容体であるカリオフェリンβ3をコードしており、RanGTP依存性のトランスポーチンファミリーに属する因子として、核膜孔複合体を介したタンパク質カーゴの選択的な核内移行を担います。核—細胞質間輸送を制御することにより、IPO5は主要な制御タンパク質の核内での利用可能性を調節し、転写プログラム、細胞周期の進行、ストレス応答性シグナル伝達に影響を与えます。核輸送ダイナミクスの変化は、がん化、ウイルス感染の生物学、神経変性としばしば関連づけられるため、IPO5は、カーゴの局在変化が細胞表現型をどのように作り替えるかを研究するうえで重要な結節点となります。ヒト細胞では、IPO5依存的な核内移行が、転写因子や他のシグナル伝達エフェクターの核内滞在を変化させることで、経路の出力を調節し得ます。

karyopherin β3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IPO5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

karyopherin β3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IPO5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIPO5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性karyopherin β3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIPO5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるkaryopherin β3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIPO5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるkaryopherin β3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。