karyopherin α2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401484-ACT

KPNA2 codifica a carioferina alfa 2, um adaptador da família importina-α que reconhece sinais clássicos de localização nuclear e coopera com a importina-β para mediar a importação nuclear regulada através do complexo do poro nuclear. Ao controlar o tráfego nucleocitoplasmático de fatores de transcrição, proteínas de reparo de DNA e reguladores do ciclo celular, a KPNA2 influencia programas de expressão gênica, a progressão mitótica e respostas ao estresse. Alterações na expressão de KPNA2 e na dinâmica de transporte têm sido associadas a fenótipos proliferativos e a redes de sinalização desreguladas frequentemente estudadas na biologia do câncer e na pesquisa sobre estabilidade do genoma. A KPNA2 também é usada como marcador de transporte nuclear perturbado, permitindo estudos mecanísticos de localização proteica e controle transcricional.

karyopherin α2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KPNA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

karyopherin α2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KPNA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KPNA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de karyopherin α2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KPNA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de karyopherin α2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via karyopherin α2 em células tumorais com expressão de KPNA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.