Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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karyopherin α1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402324-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- karyopherin α1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- karyopherin α1ダブルニカースプラスミド（h）およびkaryopherin α1ダブルニカースプラスミド（h2）は、KPNA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: karyopherin α1 抗体 (187.1): sc-101292
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
karyopherin α1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402324-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
karyopherin α1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402324-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KPNA1は、カリオフェリンα1（インポーチンα5）をコードしており、古典的な核内輸送経路におけるアダプターとして機能します。KPNA1は、輸送対象タンパク質に存在する塩基性の核移行シグナル（NLS）を認識し、それらをインポーチンβに結び付けることで、Ran GTPase依存的に核膜孔複合体を通過する移行を仲介します。核―細胞質間輸送を制御することにより、KPNA1は転写因子や制御酵素の核内アクセスを調節し、細胞周期の進行、DNA損傷シグナル、自然免疫における転写応答、ならびにストレス適応プログラムに影響を与えます。インポーチン介在性輸送の異常は、がんや神経変性、炎症性の状況で見られるシグナル伝達ネットワークの破綻や遺伝子発現状態の再編成と関連付けられています。KPNA1はまた、宿主—病原体相互作用の文脈でも研究されており、ウイルスや細菌のエフェクターの核内移行が、複製や免疫回避機構を形作る可能性があります。
karyopherin α1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KPNA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KPNA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KPNA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KPNA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。