KANK4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414866-ACT

ヒトKANK4（KNモチーフおよびアンキリンリピートドメイン4）は、皮質微小管とアクチンの協調および細胞―細胞外基質相互作用に寄与する細胞骨格アダプターをコードします。KNモチーフ依存的なキネシンファミリー分子との相互作用と、アンキリンリピートを介したタンパク質結合を通じて、KANK4はフォーカルアドヒージョンの動態、細胞極性、方向性移動と関連し、これらは組織構築やメカノトランスダクションを形作る過程です。KANKファミリータンパク質は、Rho GTPaseシグナル伝達、接着のターンオーバー、細胞骨格の再構築に関わる経路で研究されており、KANK4は浸潤挙動や細胞運動性表現型の変化に関する研究において重要です。KANK4を含む細胞骨格／接着制御因子の発現異常やゲノム変化は、移動および接着プログラムが攪乱されるがん生物学や発生学的状況で頻繁に検討されています。

KANK4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KANK4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KANK4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KANK4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKANK4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KANK4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKANK4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKANK4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKANK4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKANK4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。