KAI 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401317-NIC

CD82（KAI1）は、膜マイクロドメインを組織化し、インテグリン依存的な接着、運動性、受容体シグナル伝達を調節するテトラスパニン型の細胞表面糖タンパク質です。テトラスパニン、インテグリン、増殖因子受容体の相互作用を調整することで、KAI1は細胞骨格の再構築、エンドサイトーシス、ならびに細胞移動や生存に関わる下流経路に影響を及ぼします。CD82の発現量や局在の変化は、腫瘍の進展、浸潤、転移性播種に加え、免疫細胞のトラフィッキングや炎症性シグナル伝達の文脈でも頻繁に研究されています。これらの特性により、CD82はヒト細胞モデルにおいて、膜シグナル伝達の構造、接着ダイナミクス、経路間クロストークを解析するための有用な標的となります。

KAI 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD82 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD82内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD82の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD82が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。