JNK1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424053-ACT

Mapk8 は c-Jun N-terminal kinase 1（JNK1）をコードしており、細胞外からの刺激を統合して転写、アポトーシス、増殖、サイトカインシグナル伝達を制御するストレス応答性 MAP キナーゼです。JNK1 は MAP3K/MKK4/7 カスケードの下流で JUN および他の AP-1 構成因子をリン酸化し、炎症や、酸化ストレス・遺伝毒性ストレス・小胞体（ER）ストレスへの細胞適応に関わる遺伝子プログラムを形成します。マウスモデルでは、JNK1 活性は免疫シグナル、代謝恒常性、神経のストレス応答を研究するために広く用いられており、経路の破綻は慢性炎症性表現型や組織リモデリングと関連します。これらの機能により、Mapk8 は NF-κB、インスリンシグナル、ミトコンドリアストレス経路との MAPK クロストークを解析するうえでの中核的ノードとなっています。

JNK1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mapk8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

JNK1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mapk8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMapk8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性JNK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMapk8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJNK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMapk8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJNK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。