JMJD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401883-ACT

ヒトのKDM6Bは、ヒストンリシン脱メチル化酵素JMJD3をコードしている。JMJD3はFe(II)/2-オキソグルタル酸依存性酵素で、転写抑制的なH3K27me3マークを除去することで、細胞運命転換に結び付く転写プログラムを促進する。JMJD3はクロマチンリモデリング機構やPolycombにより制御される遺伝子ネットワークと連携し、系譜決定、炎症関連遺伝子の発現、刺激応答性の転写を制御する。これらのエピジェネティック機構を通じてKDM6Bは、分化、細胞老化、免疫シグナル伝達経路の調節に寄与し、発生異常、がんに伴う転写リプログラミング、慢性炎症状態の研究において重要である。JMJD3の活性または発現が攪乱されると、エンハンサーおよびプロモーターのランドスケープが変化し、NF-κB応答性転写などの下流経路や、状況依存的ながん促進／腫瘍抑制プログラムに影響を及ぼし得る。

JMJD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KDM6Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

JMJD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KDM6B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKDM6B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性JMJD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKDM6B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJMJD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKDM6B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJMJD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。