JMJD2D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404743-ACT

O KDM4D humano codifica a desmetilase de lisina de histonas JMJD2D, uma enzima com domínio Jumonji C (JmjC) que remove marcas repressoras de metilação na histona H3, particularmente H3K9me3/me2. Ao remodelar a acessibilidade da cromatina, a JMJD2D influencia programas transcricionais ligados às respostas a danos no DNA, ao controle do ciclo celular e à regulação de genes específica de linhagem. A atividade de KDM4D interage com redes epigenéticas e de sinalização que governam a estabilidade do genoma e a plasticidade transcricional, processos frequentemente perturbados no câncer e em outros distúrbios caracterizados por estados de cromatina desregulados. Como fator modificador da cromatina, a JMJD2D é amplamente estudada por seu papel em modular a atividade de enhancers e promotores e coordenar a expressão gênica dependente do contexto.

JMJD2D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM4D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JMJD2D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM4D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM4D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JMJD2D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM4D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JMJD2D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JMJD2D em células tumorais com expressão de KDM4D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.