JMJD2C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403282-ACT

KDM4C (JMJD2C) codifica uma desmetilase de histonas contendo o domínio Jumonji C (JmjC) que remove principalmente marcas metiladas repressivas, como H3K9me3/me2, promovendo a abertura da cromatina e a competência transcricional. Por meio da regulação dinâmica da metilação de histonas, a JMJD2C influencia o controle epigenético de programas de expressão gênica ligados à progressão do ciclo celular, às respostas a danos no DNA e a redes de transcrição específicas de linhagem. A atividade desregulada de KDM4C tem sido associada a estados de cromatina aberrantes observados em múltiplos cânceres, nos quais a acessibilidade alterada de enhancers e promotores pode reforçar circuitos transcricionais oncogênicos. Como regulador nuclear da cromatina, a JMJD2C é frequentemente estudada por seus papéis na cooperação com fatores de transcrição, no remodelamento da cromatina e na manutenção da plasticidade epigenética em células humanas.

JMJD2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM4C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JMJD2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM4C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM4C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JMJD2C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM4C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JMJD2C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JMJD2C em células tumorais com expressão de KDM4C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.