Jagged1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400208-ACT

ヒトのJAG1は、膜結合型リガンドであるJagged1をコードしており、隣接細胞上の受容体に結合することでカノニカルNotchシグナル伝達を活性化し、Notch細胞内ドメインのプロテアーゼ依存的な放出と転写プログラムの再構築を促進する。この経路は、発生期および成体の恒常性維持において、細胞運命の決定、分化、幹細胞・前駆細胞の維持、ならびに組織パターニングを制御する。Jagged1により駆動されるNotch活性は、血管新生、炎症、細胞外マトリックスのリモデリングといったプログラムと統合され、微小環境からのシグナルや細胞間コミュニケーションを形成する。JAG1/Notchシグナルの制御異常は、発生異常や多様な病態（腫瘍化プロセスや血管異常を含む）と関連づけられており、機序解明を目的とした経路研究で頻繁に標的とされている。

Jagged1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性JAG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Jagged1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における JAG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はJAG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Jagged1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のJAG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJagged1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびJAG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJagged1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。