Plásmido CRISPR de Activación (h) JAB1: sc-401302-ACT

COPS5 codifica JAB1 (también conocida como CSN5), una subunidad catalítica del signalosoma COP9 que regula las ligasas de ubiquitina cullin-RING mediante desnedilación, moldeando así la proteostasis y la progresión del ciclo celular. Al modular el recambio dependiente de ubiquitina de proteínas clave de señalización y de puntos de control, JAB1 influye en vías vinculadas a las respuestas al daño del ADN, el control transcripcional y la adaptación al estrés celular. JAB1 también interactúa con la señalización de receptores nucleares y con programas transcripcionales relacionados con la respuesta inmunitaria, ayudando a coordinar una expresión génica específica del contexto. La actividad desregulada de COPS5/JAB1 se ha asociado con proliferación alterada, señalización de supervivencia y fenotipos invasivos en múltiples modelos relevantes para el cáncer, lo que la convierte en un objetivo frecuente de estudios mecanísticos de los circuitos oncogénicos.

JAB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COPS5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

JAB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COPS5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COPS5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de JAB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COPS5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de JAB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía JAB1 en células tumorales con expresión de COPS5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.