ITI-H4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403358-ACT

ITIH4 codifica a cadeia pesada 4 do inibidor inter-α-tripsina (ITI-H4), uma glicoproteína secretada enriquecida no fígado que circula no plasma e participa da biologia da matriz extracelular e de processos inflamatórios regulados por proteases. A ITI-H4 está associada à proteólise ligada à fase aguda e à remodelação de matrizes ricas em hialuronano por meio de interações na rede da família inter-α-inibidor, influenciando a homeostase tecidual durante lesão e inflamação. Alterações na expressão ou no processamento de ITIH4 têm sido relatadas em estados inflamatórios sistêmicos e em múltiplas assinaturas proteômicas relacionadas ao câncer, sustentando sua utilidade como leitura mecanística em estudos do secretoma associados a doenças. Em modelos celulares e de plasma, a ITI-H4 oferece um nó tratável para examinar como programas hepáticos moldam a sinalização extracelular, vias adjacentes à coagulação e o diálogo cruzado imune–estroma.

ITI-H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITIH4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ITI-H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITIH4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITIH4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ITI-H4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITIH4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ITI-H4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ITI-H4 em células tumorais com expressão de ITIH4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.