ITI-H3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404269-ACT

インターアルファトリプシンインヒビター重鎖3（inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain 3：ITIH3）は、細胞外マトリックス（ECM）に関連するプロテオグリカン成分であるITI-H3をコードしており、インターアルファインヒビター複合体との相互作用を介して、ヒアルロン酸に富むマトリックスの安定化に寄与します。細胞周囲マトリックスの構築を調節することで、ITI-H3は細胞接着、遊走、ならびに炎症や間質生物学に関連する組織リモデリング過程に影響を及ぼし得ます。ITIH3の発現変化は、腫瘍微小環境ダイナミクスや神経精神疾患関連形質の遺伝学に関する研究で報告されており、ECMの状態や細胞—マトリックス間シグナル伝達のコンテキスト依存的マーカーとしての利用を支持します。これらの特性により、ITIH3は、ヒアルロン酸依存性経路、分泌タンパク質の制御、ならびにマトリックス駆動性表現型をヒト細胞モデルで解析するための有用な標的となります。

ITI-H3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITIH3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ITI-H3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITIH3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITIH3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ITI-H3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITIH3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるITI-H3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITIH3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるITI-H3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。