ITI-H1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403720-NIC

ITIH1 codifica la catena pesante 1 dell’inibitore inter-α della tripsina (ITI-H1), una glicoproteina secreta di origine epatica che contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare tramite legame covalente con l’ialuronano attraverso il complesso inter-α-inibitore contenente bikunin. Questa attività influenza la stabilità della matrice pericellulare, le interazioni cellula–matrice e i microambienti infiammatori modulando processi dipendenti dall’ialuronano. ITI-H1 è spesso studiata nel contesto della biologia della fase acuta, della regolazione delle proteasi nello spazio extracellulare e del rimodellamento delle matrici stromali. Alterazioni dell’espressione di ITIH1 o varianti genetiche sono state riportate in diversi contesti infiammatori e fibrotici e in studi sul microambiente associato all’oncologia, a supporto della sua utilità come bersaglio per la biologia della matrice e per associazioni con la malattia in modelli umani.

ITI-H1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITIH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITIH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITIH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITIH1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.