ISG15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400996-ACT

ヒトISG15は、インターフェロン刺激によって誘導されるユビキチン様修飾因子をコードしており、ISGylation（ISG化）カスケードを介して細胞内およびウイルス由来タンパク質に結合（コンジュゲーション）することで、自然免疫シグナル伝達とプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の形成に関与します。ISG15は、JAK–STATシグナル伝達などの経路を調節し、主要な抗ウイルスエフェクターの活性や安定性に影響を与えることでI型インターフェロン応答を制御し、さらに分泌性の免疫調節因子としての役割も担います。これらの機構を通じて、ISG15はウイルス感染、炎症性刺激、ストレスに対する細胞応答に影響し、その制御異常はインターフェロンシグナルの異常表現型や免疫関連疾患の機序と関連づけられています。がん研究や感染症研究では、ISG15は免疫回避、炎症、インターフェロン駆動性の転写プログラムに関わる、状況依存的なメディエーターとして頻繁に研究されています。

ISG15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ISG15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ISG15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ISG15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はISG15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ISG15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のISG15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるISG15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびISG15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるISG15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。