IRS-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400474-NIC

インスリン受容体基質2（IRS2）は、インスリン受容体およびIGF-1受容体からのシグナルを、グルコース代謝、脂質恒常性、細胞増殖、生存を制御する下流エフェクターへと伝達するドッキングアダプターであるIRS-2をコードする。受容体によるチロシンリン酸化を受けると、IRS-2はPI3KなどのSH2ドメインタンパク質をリクルートしてAKT/mTORシグナルを活性化し、さらにRAS–MAPK経路とも連携して転写および代謝プログラムを調節する。IRS-2の活性はインスリン感受性、肝臓での糖新生、脂肪細胞機能に影響し、IRS2シグナルの変調は代謝機能障害やインスリン抵抗性と関連づけられている。IRS-2依存性シグナルの破綻は、PI3K–AKT経路の再構築が疾患関連の表現型に寄与する、異常増殖やストレス応答の文脈でも研究されている。

IRS-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IRS2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IRS2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IRS2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IRS2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。