Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
IRF-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424184
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IRF-5 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IRF-5, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IRF-5 Antibody (10T1): sc-56714
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IRF-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424184 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino *Irf5* codifica il fattore regolatore dell’interferone 5 (IRF-5), un fattore di trascrizione che integra il riconoscimento immunitario innato con i programmi genici infiammatori a valle. IRF-5 viene attivato a valle dei recettori Toll-like endosomiali e della segnalazione dipendente da MyD88, promuovendo l’espressione dell’interferone di tipo I e di reti di citochine pro-infiammatorie attraverso una regolazione coordinata dei geni stimolati dall’interferone. In macrofagi, cellule dendritiche e cellule B, IRF-5 contribuisce alla polarizzazione e alle risposte effettrici, modellando l’equilibrio citochinico e l’immunità guidata dall’antigene. Un’attività di IRF-5 deregolata è stata associata a fenotipi autoimmuni e infiammatori, rendendo *Irf5* un nodo utile per analizzare vie rilevanti per la deregolazione immunitaria sistemica in modelli murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRF-5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Irf5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Irf5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Irf5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRF-5.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Irf5 per lo studio della segnalazione di IRF-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Irf5 critici per la funzione di IRF-5
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Irf5 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IRF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IRF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Irf5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IRF-5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IRF-5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Irf5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Irf5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.