IRAK-4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416405-ACT

インターロイキン1受容体関連キナーゼ4（IRAK4）は、MyD88依存性のToll様受容体（TLR）およびIL-1受容体ファミリーの下流に位置する近位シグナル伝達ノードとして機能するセリン／スレオニンキナーゼであるIRAK-4をコードしています。受容体が活性化されると、IRAK-4はマイドソーム（myddosome）の形成を助け、TRAF6およびTAK1へシグナルを伝達してNF-κBおよびMAPK経路を活性化し、サイトカインやケモカインの転写プログラムを規定します。この経路は、自然免疫によるセンシング、インフラマソーム関連応答、ならびにインターフェロンシグナルネットワークとのクロストークの中核を担います。IRAK4の活性や発現の破綻は、異常な炎症性シグナル伝達および免疫介在性病態と関連づけられており、感染生物学、自己免疫、血液悪性腫瘍といった文脈で、その経路出力の変化が研究されています。

IRAK-4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IRAK4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IRAK-4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IRAK4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIRAK4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IRAK-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIRAK4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIRAK-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIRAK4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIRAK-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。