IRAK-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416405-ACT

A quinase 4 associada ao recetor de interleucina-1 (IRAK4) codifica a IRAK-4, uma quinase de serina/treonina que funciona como um nó proximal de sinalização a jusante de recetores Toll-like dependentes de MyD88 e de membros da família do recetor de IL-1. Após a ativação do recetor, a IRAK-4 ajuda a montar o myddossoma e propaga a sinalização para TRAF6 e TAK1, promovendo a ativação das vias de NF-κB e MAPK e moldando programas transcricionais de citocinas e quimiocinas. Esta via é central para a deteção imunitária inata, para respostas associadas ao inflamassoma e para a comunicação cruzada com redes de sinalização de interferão. A atividade ou expressão desregulada de IRAK4 tem sido associada a sinalização inflamatória aberrante e patologia mediada pelo sistema imunitário, e a alteração do output da via é estudada em contextos de biologia da infeção, autoimunidade e neoplasias hematológicas.

IRAK-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRAK4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRAK-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRAK4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRAK4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRAK-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRAK4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRAK-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRAK-4 em células tumorais com expressão de IRAK4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.