IRAK-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404304-ACT

O IRAK2 humano codifica a quinase 2 associada ao receptor de interleucina-1 (IRAK-2), uma quinase de sinalização que conecta a ativação de receptores Toll-like (TLR) e do receptor de IL-1 a programas transcricionais inflamatórios a jusante. A IRAK-2 atua na via dependente de MyD88 para promover a montagem e a sinalização do complexo IRAK, facilitando a ativação das cascatas de NF-κB e MAPK e modulando a expressão de citocinas e quimiocinas. Por meio desses processos, a IRAK-2 ajuda a coordenar respostas imunes inatas, e a sinalização desregulada está associada à inflamação crônica e a alterações na homeostase imunológica. A conectividade dessa via torna o IRAK2 um ponto útil para estudar saídas transcricionais dependentes do estímulo, regulação por feedback e a comunicação cruzada entre vias inflamatórias e de resposta ao estresse.

IRAK-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRAK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRAK-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRAK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRAK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRAK-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRAK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRAK-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRAK-2 em células tumorais com expressão de IRAK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.