Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRAK-1: sc-400264-ACT

IRAK1 code la kinase 1 associée au récepteur de l’interleukine‑1 (IRAK‑1), une sérine/thréonine kinase qui fait le lien entre l’engagement des récepteurs de type Toll (TLR) et du récepteur de l’IL‑1 et les voies de signalisation innée en aval. Après activation des récepteurs, IRAK‑1 participe à l’assemblage de complexes dépendants de MyD88 ainsi qu’à des événements de phosphorylation favorisant l’activation de TRAF6, ce qui conduit à l’activation des voies NF‑κB et MAPK et à la transcription de médiateurs inflammatoires. Ce nœud régule la production de cytokines, l’activation des cellules immunitaires et l’interconnexion avec des programmes contrôlés par les interférons. Une activité d’IRAK‑1 et un flux de signalisation dérégulés ont été associés à une signalisation inflammatoire aberrante observée dans divers troubles immuno‑médiés et dans l’inflammation associée aux tumeurs, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents.

IRAK-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRAK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRAK-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRAK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRAK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRAK-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRAK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRAK-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRAK-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRAK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.