IRAK-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400264-ACT

IRAK1 codifica a quinase 1 associada ao recetor de interleucina-1 (IRAK-1), uma quinase de serina/treonina que liga a ativação dos recetores do tipo Toll e do recetor de IL-1 à sinalização imunitária inata a jusante. Após a ativação do recetor, a IRAK-1 participa na montagem de complexos dependentes de MyD88 e em eventos de fosforilação que promovem a ativação de TRAF6, levando à sinalização das vias NF-κB e MAPK e à transcrição de mediadores inflamatórios. Este nó influencia a produção de citocinas, a ativação de células imunitárias e a comunicação cruzada com programas regulados por interferão. A atividade desregulada de IRAK-1 e o fluxo da via têm sido associados à sinalização inflamatória aberrante observada em várias doenças mediadas pelo sistema imunitário e na inflamação associada a tumores, motivando estudos mecanísticos em modelos celulares relevantes.

IRAK-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRAK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRAK-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRAK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRAK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRAK-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRAK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRAK-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRAK-1 em células tumorais com expressão de IRAK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.