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IP3R-III双切口酶质粒(h) | sc-402138-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3R-III双切口酶质粒(h2) | sc-402138-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 ITPR3 基因编码 IP3R-III,这是一种位于内质网膜上的 Ca²⁺ 释放通道,可被磷脂酶 C(PLC)信号通路下游产生的肌醇 1,4,5-三磷酸(IP3)激活。通过塑造细胞质及细胞器内的 Ca²⁺ 动态,IP3R-III 通过内质网–线粒体接触位点处的 Ca²⁺ 转运,调控兴奋–分泌耦联、线粒体生物能量学、内质网应激反应以及细胞凋亡。ITPR3 依赖性的钙通量将 GPCR 和受体酪氨酸激酶的输入与转录程序及代谢适应相整合,从而影响细胞命运决定。IP3R-III 的表达或信号失调与癌症生物学、上皮生理以及炎症信号等情境中的钙稳态异常相关,因此可作为通路研究中的关键机制节点。
IP3R-III 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 ITPR3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ITPR3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏ITPR3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了ITPR3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。