IP3R-II Double Nickaseプラスミド (h): sc-401067-NIC

ITPR2は、イノシトール1,4,5-三リン酸受容体2型（IP3R-II）をコードしており、これは小胞体からCa²⁺を放出するチャネルとして、ホスホリパーゼC由来のIP₃シグナルを細胞質内カルシウムの一過性変動へと変換します。IP3R-IIを介したCa²⁺フラックスは、興奮―分泌連関、上皮・内皮のシグナル伝達、ならびにCaMK、カルシニューリン/NFAT、ミトコンドリアCa²⁺クロストークなどの経路を通じた転写プログラムを制御します。空間的に限定されたCa²⁺波を介して、IP3R-IIは、特殊化した組織における細胞代謝、アポトーシス感受性、バリア機能や輸送機能にも影響を与えます。ITPR2の活性または発現の変化は、分泌上皮や関連する生理過程に影響する病態におけるCa²⁺恒常性の破綻と関連づけられており、カルシウムシグナル伝達ネットワークの機序研究における有用性を支持しています。

IP3R-II ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITPR2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITPR2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITPR2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITPR2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。