IP3KC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408964-ACT

ITPKC は、イノシトール三リン酸 3-キナーゼ C（IP3KC）をコードしており、これはイノシトール 1,4,5-三リン酸（IP3）をリン酸化して IP4 を産生する酵素である。これにより、細胞内ストアからの IP3 依存的な Ca2+ 動員が調節される。IP3KC は細胞質 Ca2+ 動態を形成することで、セカンドメッセンジャーのフラックスを転写プログラムへ結び付ける下流のシグナル伝達カスケードに影響し、リンパ球活性化に関連する経路を含む、より広範な免疫シグナル伝達にも関与する。ITPKC 活性の変化は、Ca2+ 依存応答の制御異常や炎症性表現型と関連付けられており、シグナル統合機構や免疫細胞機能の解明を目的とした機序研究において重要である。ホスホイノシチド代謝および Ca2+ シグナルの結節点として、IP3KC は、刺激依存的な転写や細胞活性化の閾値が検討される文脈で頻繁に研究対象となっている。

IP3KC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITPKCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IP3KC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITPKC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITPKC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IP3KCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITPKC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIP3KC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITPKC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIP3KC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。