involucrin Double Nickaseプラスミド (h): sc-416724-NIC

IVLは、角化細胞の分化マーカーであるインボルクリンをコードしており、インボルクリンはトランスグルタミナーゼによって架橋されて角化細胞膜（cornified envelope）に組み込まれ、表皮バリアを強化します。インボルクリンは、ケラチン中間径フィラメントの再編成や、角化（cornification）を支えるカルシウム依存性シグナル伝達と協調して進む終末分化プログラムに関与します。IVLの発現異常や角化細胞膜の組み立て異常は、乾癬やアトピー性皮膚炎などの炎症性・過増殖性皮膚疾患における表皮恒常性の破綻と関連づけられており、バリア機能不全の文脈で頻繁に検討されています。そのためIVLは、重層上皮の成熟、バリア形成、ならびに角化細胞の運命を制御する転写ネットワークを研究するうえで広く用いられています。

involucrin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IVL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IVL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IVLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IVLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。