Intersectin-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402531-ACT

ITSN2はintersectin-2をコードしており、intersectin-2は複数のドメインをもつエンドサイトーシスの足場タンパク質で、ダイナミンの制御因子、アクチン再構成、低分子量GTPaseの調節因子などとのSH3ドメイン介在性相互作用を通じて、クラスリン介在性の膜輸送とシグナル出力を統合します。エンドサイトーシス、小胞リサイクリング、細胞骨格ダイナミクスを協調的に制御することで、intersectin-2は受容体の取り込み、シナプスおよび神経細胞における輸送プログラム、ならびにシグナル伝達の空間的制御に寄与します。文献では、ITSN2関連ネットワークの攪乱が、増殖因子シグナルの変化や膜動態の異常と関連づけられており、これらはがん生物学および神経発生過程に関わるものとして報告されています。そのモジュール型の構造により、ITSN2は輸送経路とキナーゼ駆動型シグナル伝達カスケードのクロストークを解析するための有用なハブ（ノード）となります。

Intersectin-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITSN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Intersectin-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITSN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITSN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Intersectin-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITSN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntersectin-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITSN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntersectin-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。