Integrin αV/ITGAV/CD51 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400506-ACT

ITGAV kodiert Integrin αV (CD51), eine α‑Untereinheit, die mit mehreren β‑Partnern (z. B. β3, β5, β6, β8) zu Heterodimeren assoziiert und so Rezeptoren für extrazelluläre Matrixliganden mit RGD‑Motiven bildet, etwa Vitronectin, Fibronectin und Osteopontin. Durch Ligandenbindung und Integrin‑Clustering koordinieren αV‑haltige Integrine den Aufbau fokaler Adhäsionen und die Mechanotransduktion, aktivieren die FAK/SRC‑Signalgebung sowie nachgeschaltete PI3K‑AKT‑ und MAPK‑Signalwege, die Adhäsion, Migration, Überleben und zytoskelettales Remodeling regulieren. ITGAV ist zudem mit der TGF‑β‑Biologie verknüpft, indem αVβ6/αVβ8 die Aktivierung von latentem TGF‑β vermitteln und so Matrix‑Sensing mit inflammatorischen und fibrotischen Programmen koppeln. Eine dysregulierte ITGAV‑Aktivität wurde mit invasivem Zellverhalten, angiogenen Antworten und Remodeling‑Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Krebsprogression, Fibrose und Interaktionen mit dem Immun‑Mikromilieu relevant sind.

Integrin αV/ITGAV/CD51 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGAV-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin αV/ITGAV/CD51 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGAV-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGAV-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin αV/ITGAV/CD51-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGAV-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin αV/ITGAV/CD51-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin αV/ITGAV/CD51-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGAV-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.