Integrin αV/ITGAV/CD51 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400506-ACT

ITGAV codifica a integrina αV (CD51), uma subunidade α que forma heterodímeros com múltiplas subunidades β (por exemplo, β3, β5, β6, β8) para constituir recetores de ligandos da matriz extracelular que contêm motivos RGD, como vitronectina, fibronectina e osteopontina. Por meio da ligação ao ligando e do agrupamento de integrinas, as integrinas que contêm αV coordenam a montagem de adesões focais e a mecanotransdução, ativando a sinalização FAK/SRC e, a jusante, as vias PI3K–AKT e MAPK, que regulam a adesão, migração, sobrevivência e a remodelação do citoesqueleto. O ITGAV também se relaciona com a biologia do TGF-β por meio da ativação do TGF-β latente mediada por αVβ6/αVβ8, ligando a perceção da matriz a programas inflamatórios e fibróticos. A atividade desregulada de ITGAV tem sido associada a comportamento celular invasivo, respostas angiogénicas e fenótipos de remodelação relevantes para a progressão do cancro, fibrose e interações com o microambiente imunitário.

Integrin αV/ITGAV/CD51 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGAV sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin αV/ITGAV/CD51 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGAV em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGAV, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin αV/ITGAV/CD51. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGAV nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin αV/ITGAV/CD51 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin αV/ITGAV/CD51 em células tumorais com expressão de ITGAV silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.