Integrin αV/ITGAV/CD51 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400506-ACT

ITGAVはインテグリンαV（CD51）をコードしており、このαサブユニットは複数のβサブユニット（例：β3、β5、β6、β8）とヘテロ二量体を形成し、ビトロネクチン、フィブロネクチン、オステオポンチンなど、RGDモチーフを含む細胞外マトリックス（ECM）リガンドの受容体として機能します。リガンド結合とインテグリンのクラスター形成を介して、αV含有インテグリンはフォーカルアドヒージョンの組み立てとメカノトランスダクションを統合的に制御し、FAK/SRCシグナルならびに下流のPI3K–AKT経路やMAPK経路を活性化して、接着、遊走、生存、細胞骨格リモデリングを調節します。さらにITGAVは、αVβ6/αVβ8による潜在型TGF-βの活性化を介してTGF-β生物学とも連動し、マトリックスの感知を炎症・線維化プログラムへと結び付けます。ITGAV活性の破綻（異常な亢進/制御不全）は、浸潤性の細胞挙動、血管新生応答、リモデリング表現型と関連づけられており、がん進展、線維化、免疫微小環境の相互作用に関わる現象として重要視されています。

Integrin αV/ITGAV/CD51 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGAVの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin αV/ITGAV/CD51 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGAV 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGAV転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin αV/ITGAV/CD51の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGAV遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin αV/ITGAV/CD51依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGAV発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin αV/ITGAV/CD51経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。